sadness (23-12-2013)
Bạn đang lo lắng về HIV cần tư vấn bạn ĐT hoặc thời gian phơi nhiễm HIV sắp hết 72 giờ. Bạn ĐT hoàn toàn miễn phí cho:Tuanmecsedec: 098.2727.393.
Tư Vấn Zalo : (0982727393) Tuanmecsedec
Giấy chứng nhận tham vấn số : 041/UB AIDS - TV do ủy ban phòng chống HIV/AIDS TPHCM cấp ngày 15/5/2009.
sadness (23-12-2013)
Dạ cám ơn a Hiếu,kết quả xn bao lâu mới có vậy anh ?
em muốn nhận kết quả xn trong ngày ko biết có đc ko.Mấy tuần lễ nay stress kinh khủng
sadness (23-12-2013)
Các anh ơi cho e hỏi là sáng nay e đi xn ở Paster,lấy tờ giấy yeu cầu xn,e đánh vô phần bệnh XH là giang mai & hiv,lúc in hóa đơn ra họ ghi yêu cầu là
- HIV : kháng thể kháng HIV (cái này đúng với lời tư vấn của A.Hiếu & A.Tuấn là để giải stress)
- G.Mai : Huyết thanh chuẩn đoán G.Mai
Vì nguy cơ của e cho đến nay là 6 tuần 4 ngày,ko bít họ xn G.Mai cho e theo pp gì,vì theo tư vấn của a.Tuấn là TPHA & RPR,nếu kết quả âm tính thì có khả quan ko nhỉ?
Lần sửa cuối bởi sadness, ngày 23-12-2013 lúc 14:34.
Bạn tham khảo nhé:
CÁC KỸ THUẬT HUYẾT THANH CHẨN ĐOÁN BỆNH GIANG MAI
Chẩn đoán huyết thanh giang mai có rất nhiều phương pháp khác nhau, từ những kỹ thuật đơn giản có tính chất sàng lọc, không đặc hiệu với kháng nguyên xoắn khuẩn giang mai là cardiolipin như phản ứng cố định bổ thể BW (Border Wasses mainn), kỹ thuật VDRL (Venereal Disease Research laboratory test), kỹ thuật RPR (Rapid Plasma Reagin) đến những kỹ thuật phức tạp, đặc hiệu có tính chất khẳng định, với việc sử dụng kháng nguyên chính là xoắn khuẩn giang mai (Treponema pallidum), như là kỹ thuật bất động xoắn khuẩn giang mai TPI (Treponema pallidum Immobilization) Kỹ thuật huỳnh quang FTA (Fluorescent Treponema Antibody test), kỹ thuật ngưng kết hồng cầu thụ động TPHA (Treponema pallidum heamagglutination) Việc áp dụng các kỹ thuật khác nhau tuỳ vào thiết bị và các điều kiện của phòng xét nghiệm. Ở đây chỉ giới thiệu 2 kỹ thuật RPR và TPHA
KỸ THUẬT RPR CHẨN ĐOÁN GIANG MAI
1. Nguyên tắc
Kỹ thuật RPR (Rapid Plasma Reagin) là một kỹ thuật huyết thanh học phát hiện bệnh giang mai. Kháng nguyên một huyền dịch gồm các hạt carbon được bao phủ một phức hợp lipid. Kháng thể Reagin có trong huyết thanh bệnh nhân giang mai. Ngưng kết được nhìn thấy là các cụm hạt màu đen khi huyết thanh bệnh nhân có chứa kháng thể kháng reagin, có thể quan sát hạt ngưng kết bằng kính lúp (Macroscope).
2. Hoá chất
Hoá chất
RPR Carbon antigen
Huyền dịch các hạt Carbon trung tính được bao phủ một phức hợp lipid, (dịch có chứa Sodium azide 0,95gl)
Positive control.
Huyết thanh người (có chứa Sodium azide 0,95gl)
Negative control
Huyết thanh động vật (có chứa Sodium azide 0,95gl)
Kim hút 16ml
Lọ hút
Phiến nhựa
Ống hút
Ghi chú:
* Các sinh phẩm đã được thử nghiệm cho kết quả âm tính với HBsAg và HIV, HCV, tuy nhiên trong quá trình thao tác cần thiết phải cẩn thận như các mẫu bệnh phẩm có khả năng lây nhiễm.
* Hoá chất bảo quản ở 2-8oC. Phiến nhựa và các ống hút bảo quản ở nhiệt độ phòng.
3. Mẫu bệnh phẩm
* Huyết thanh và huyết tương ổn định 48 giờ ở 2-8oC
* Mẫu bệnh phẩm nên tách huyết thanh chống nhiễn khuẩn và tan huyết.
* Lipid trong máu không ảnh hưởng đến kết quả trừ khi nó có quá nhiều làm che phủ hạt kháng nguyên.
4. Chuẩn bị hoá chất:
* Lắc kỹ huyền dịch hạt carbon, dùng kim hút chuyển một ít sang lọ nhựa cung cấp theo bộ kít, huyền dịch kháng nguyên sau khi chia sang lọ nhỏ nên sử dụng trong vòng 3 tháng.
* Thiết bị cần có để thực hiện: máy lắc tròn sử dụng chế độ 100rpm, biên độ lắc là 2cm.
5. Quy trình thao tác:
5.1. Test định tính:
* Thuốc thử để ở nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.
* Nhỏ 50 ml huyết thanh bệnh nhân và các chứng âm dương vào mỗi vòng thử nghiệm trên phiến nhựa.
* Nhỏ một giọt huyền dịch kháng nguyên vào mỗi vòng thử nghiệm.
* Trộn nhẹ nhàng bằng que khuấy, dùng que khuấy riêng biệt cho mỗi mẫu.
* Lắc tròn 100rpm trong 8 phút.
5.2. Test định lượng:
* Thuốc thử để ở nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.
* Nhỏ 50 ml nước muối sinh lý vào các vòng 2,3,4,5,
* Nhỏ 50 ml huyết thanh bệnh nhân vào vòng 1 và 2 .
* Dùng pipette trộn đều hỗn dịch ở vòng 2, chuyển 50 ml sang vòng 3, tương tự chuyển sang vòng 4… bỏ 50 ml cuối cùng
* Nhỏ một giọt huyền dịch kháng nguyên vào mỗi vòng thử nghiệm.
* Trộn nhẹ nhàng bằng que khuấy, dùng que khuấy riêng biệt cho mỗi mẫu.
* Lắc tròn 100rpm trong 8 phút.
5.3. Kiểm tra chất lượng:
* Mỗi mẫu huyết thanh đều làm cùng lúc với chứng âm và dương
5.4. Các ghi chú:
* Sau mỗi ngày kim hút nên được tháo khỏi lọ nhựa đựng hoá chất, rửa sạch bằng nước cất và để khô.
* Quy trình kỹ thuật có thể thay đổi tuỳ theo hướng dẫn của nhà sản suất bộ hoá chất.
6. Nhận định kết quả:
* Khảo sát dưới kính lúp, quan sát sự hình thành các đám kết cụm nổi trên vòng thử nghiệm ngay sau khi đủ thời gian lắc.
Quan sát ngưng kết
Đọc kết quả
Ghi nhận
Kết cụm to và vừa phải
Dương tính
Có phản ứng
Kết cụm nhỏ
Dương tính yếu
Phản ứng yếu
Không ngưng kết
Am tính
Không phản ứng
* Đối với test định lượng: Hiệu giá huyết thanh được ghi nhận tại giếng có độ pha loãng lớn nhất còn cho kết quả ngưng kết
7. Các yếu tố liên quan:
* Các kỹ thuật giống như Cardiolipin không đặc hiệu với bệnh giang mai, vì vậy khi mẫu có kết quả dương tính cần thiết phải thử lại với các kỹ thuật khác như TPHA, FTA-Abs.
* Tuy nhiên khi RPR âm tính cũng không loại trừ khả năng đã mắc bệnh giang mai.
* Các dương tính giả thường gặp trong các bệnh nhiễm đơn nhân, bệnh phổi do virus và Toxoplasma, có thai và bệnh tự miễn.
KỸ THUẬT TPHA TRONG CHẨN ĐOÁN GIANG MAI
1. Nguyên tắc:
TPHA là kỹ thuật ngưng kết hồng cầu gián tiếp đủ nhạy cảm và đặc hiệu để phát hiện kháng thể kháng Treponema pallidum.
Hồng cầu được gắn kháng nguyên là thành phần của Treponema pallidum gây bệnh (chủng Nichol’s). Phản ứng ngưng kết hồng cầu xảy ra khi huyết thanh người bệnh có chứa kháng thể kháng Treponema pallidum, sự ngưng kết được nhìn thấy bằng hình dạng của một “bánh” hồng cầu trong đĩa vi lượng.
2. Hoá chất:
Bộ hoá chất bao gồm:
* TPHA Test cell (chứa HC có gắn kháng nguyên)
* TPHA Control cell (chứa HC không gắn kháng nguyên)
* Diluent (dung dịch pha loãng)
* Positive control (chứng dương, hiệu giá 1:2560)
* Negative control (chứng âm)
Các lọ sinh phẩm và hoá chất lưu giữ ở nhiệt độ từ 2-8oC ở tư thể để đứng .
Tất cả hoá chất sinh phẩm sử dụng ngay không phải pha chế. Test và Control cell nên lắc trộn nhẹ nhàng và thật kỹ trước khi sử dụng. Để ở nhiệt độ phòng trước khi dùng.
Các dụng cụ cần thiết chuẩn bị:
* Micropipette các thể tích 10ml, 25ml, 75ml, 190ml.
* Đĩa vi lượng có giếng đáy tròn.
3. Bệnh phẩm:
* Huyết thanh không nhiễm khuẩn, không bị tan huyết.
* Mẫu có thể giữ 24 giờ ở nhiệt độ 2-8oC
* Có thể giữ một thời gian dài ở nhiệt độ âm 20oC.
4. Quy trình kỹ thuật:
4.1. Kỹ thuật định tính: clas��oo����e='margin-bottom:4.0pt;text-align:justify;text-indent: 21.3pt'>KỸ THUẬT TPHA TRONG CHẨN ĐOÁN GIANG MAI
1. Nguyên tắc:
TPHA là kỹ thuật ngưng kết hồng cầu gián tiếp đủ nhạy cảm và đặc hiệu để phát hiện kháng thể kháng Treponema pallidum.
Hồng cầu được gắn kháng nguyên là thành phần của Treponema pallidum gây bệnh (chủng Nichol’s). Phản ứng ngưng kết hồng cầu xảy ra khi huyết thanh người bệnh có chứa kháng thể kháng Treponema pallidum, sự ngưng kết được nhìn thấy bằng hình dạng của một “bánh” hồng cầu trong đĩa vi lượng.
2. Hoá chất:
Bộ hoá chất bao gồm:
* TPHA Test cell (chứa HC có gắn kháng nguyên)
* TPHA Control cell (chứa HC không gắn kháng nguyên)
* Diluent (dung dịch pha loãng)
* Positive control (chứng dương, hiệu giá 1:2560)
* Negative control (chứng âm)
Các lọ sinh phẩm và hoá chất lưu giữ ở nhiệt độ từ 2-8oC ở tư thể để đứng .
Tất cả hoá chất sinh phẩm sử dụng ngay không phải pha chế. Test và Control cell nên lắc trộn nhẹ nhàng và thật kỹ trước khi sử dụng. Để ở nhiệt độ phòng trước khi dùng.
Các dụng cụ cần thiết chuẩn bị:
* Micropipette các thể tích 10ml, 25ml, 75ml, 190ml.
* Đĩa vi lượng có giếng đáy tròn.
3. Bệnh phẩm:
* Huyết thanh không nhiễm khuẩn, không bị tan huyết.
* Mẫu có thể giữ 24 giờ ở nhiệt độ 2-8oC
* Có thể giữ một thời gian dài ở nhiệt độ âm 20oC.
4. Quy trình kỹ thuật:
4.1. Kỹ thuật định tính:
* Mỗi mẫu yêu cầu sử dụng 3 giếng.
* Thêm 190ml dung dịch pha loãng vào giếng I.
* Thêm 10ml huyết thanh vào giếng I, trộn đều bằng pipette.
* Chuyển 25ml hỗn dịch từ giếng I sang giếng II và giếng III.
* (Test cell và control cell phải được lắc đều).
* Thêm 75ml control cell vào giếng số II.
* Thêm 75ml Test cell vào giếng số III.
* Gõ nhẹ phiến nhựa để trộn đều các thành phần trong giếng.
* Đậy nắp phiến nhựa để yên ở nhiệt độ phòng từ 45-60 phút hoặc qua đêm, tránh ánh sáng trực tiếp và dịch chuyển.
4.2. Kỹ thuật định lượng
* Mỗi mẫu cần 9 giếng vi lượng
* Thêm 190ml dung dịch pha loãng vào giếng I.
* Thêm 25ml dung dịch pha loãng vào giếng số 4 đến giếng số 9..
* Thêm 10ml huyết thanh vào giếng 1, trộn đều bằng pipette.
* Chuyển 25ml hỗn dịch từ giếng I sang giếng số 2, 3 và 4 .
* Trộn đều hỗn dịch ở giếng số 4 chuyển 25ml sang giếng số 5.
* Lặp lại thao tác pha loãng như trên từ giếng số 5 đến giếng số 9
* (Test cell và control cell phải được lắc đều).
* Thêm 75ml control cell vào giếng số II.
* Thêm 75ml Test cell vào giếng số 3,4,5,6,7,8 và 9.
* Gõ nhẹ phiến nhựa để trộn đều các thành phần trong giếng.
* Đậy nắp phiến nhựa để yên ở nhiệt độ phòng từ 45-60 phút hoặc qua đêm, tránh ánh sáng trực tiếp và dịch chuyển.
4.3. Hấp phụ các kháng thể không đặc hiệu:
* Có rất nhiều trường hợp huyết thanh bệnh nhân có chứa nhiều loại kháng thể không đặc hiệu nên xảy ra hiện tượng ngưng kết hồng cầu ở cả 2 giếng Test cell và control cell. Trong trường hợp này mẫu huyết thanh phải được làm lại sau khi được hấp phụ theo quy trình sau:
o Cho 100ml huyết thanh vào 1 ống nghiệm nhỏ
o Thêm vào 400ml control cells.
o Lắc kỹ, để ở nhiệt độ phòng 18-25oC trong 1 giờ.
o Ly tâm 100 rpm trong 15 phút, tách lấy phần dịch nổi và sử dụng như quy trình kỹ thuật định tính.
o Ghi nhớ rằng trong trường hợp này mẫu huyết thanh đã được pha loãng 5 lần.
o Trong trường hợp kết quả vẫn còn ngưng kết không đặc hiệu mẫu cần thiết nên làm với một kỹ thuật khác.
4.4. Kiểm tra chất lượng: Mỗi lần thực hiện nên kiểm tra đồng thời với một mẫu chứng âm và chứng dương.
5. Nhận định kết quả:
® (4+) Dương tính mạnh, ngưng kết tạo thành bánh hồng cầu tròn đầy đáy giếng, đôi khi viền ngoài gấp lại nhiều nếp.
¡ (3+) Dương tính, ngưng kết tạo thành bánh hồng cầu tròn đầy đáy giếng.
¢ (2+) Dương tính, ngưng kết tạo thành bánh hồng cầu tròn đều, có viền hồng cầu xung quang vòng ngưng kết
£ (1+) Dương tính yếu, ngưng kết tạo thành bánh hồng cầu nhỏ hơn, có viền hồng cầu xung quang vòng ngưng kết lắng sát đáy giếng.
¥ (+/-) Không xác định, hồng cầu lắng sát đáy giếng, tạo một vòng sáng rõ ở trung tâm.
¤ (-) Am tính, hồng cầu lắng sát đáy giếng, tạo nút hồng cầu trung tâm đáy giếng.
6. Cac lưu ý khác:
Chứng âm không có ngưng kết ở cả 2 giếng test cells và control cells.
Chứng dương chỉ ngưng kết ở giếng Test cells. Hiện tượng ngưng kết với Control cells cho biết có sự hiện diện các kháng thể không đặc hiệu. Kỹ thuật hấp phụ phải được làm, sau đó mẫu phải được làm lại. Mẫu huyết thanh dương tính nếu cần thiết thì làm kỹ thuật định lượng hiệu giá kháng thể.
Quy trình kỹ thuật có thể thay đổi tuỳ theo hướng dẫn của nhà sản suất bộ hoá chất.
7. Hạn chế của kỹ thuật:
o Kháng thể giang mai tồn tại một thời gian dài sau khi hoàn thành điều trị thành công.
o Để theo dõi điều trị, các kỹ thuật định lượng RPR và VDRL được khuyến cáo sử dụng TPHA không dùng để theo dõi điều trị.
o Để chẩn đoán xác định kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp nên làm phối hợp để phân biệt lớp kháng thể IgM và IgG.
sadness (23-12-2013)
Bạn đang lo lắng về HIV cần tư vấn bạn ĐT hoặc thời gian phơi nhiễm HIV sắp hết 72 giờ. Bạn ĐT hoàn toàn miễn phí cho:Tuanmecsedec: 098.2727.393.
Tư Vấn Zalo : (0982727393) Tuanmecsedec
Giấy chứng nhận tham vấn số : 041/UB AIDS - TV do ủy ban phòng chống HIV/AIDS TPHCM cấp ngày 15/5/2009.
sadness (23-12-2013)
Dạ sáng nay đi xn vì trong giấy yêu cầu xn e chỉ biết đánh vô ô xn giang mai & hiv,ko có người tư vấn cho e nên e cũng ko bít phải làm sao để yêu cầu làm 2 pp như trên,khi nào có kết quả e sẽ nhờ các a tư vấn tiếp ạ,tại hóa đơn in ra ko rõ pp nào,chỉ ghi chung chung là huyết thanh chẩn đoán giang mai thui ! Cám ơn 2 anh nhiều !
Bạn đang lo lắng về HIV cần tư vấn bạn ĐT hoặc thời gian phơi nhiễm HIV sắp hết 72 giờ. Bạn ĐT hoàn toàn miễn phí cho:Tuanmecsedec: 098.2727.393.
Tư Vấn Zalo : (0982727393) Tuanmecsedec
Giấy chứng nhận tham vấn số : 041/UB AIDS - TV do ủy ban phòng chống HIV/AIDS TPHCM cấp ngày 15/5/2009.
sadness (23-12-2013)
Dạ nếu gặp được bác sỹ Nghĩa thì e sẽ chuyển lời giúp a.Tuấn!! thứ 4 e đi lấy kết quả ah !
Các anh ơi,chiều nay e mới lấy kết quả xn HIV và Giang Mai đều âm tính hết
- HIV Âm tính pp chiến lược 3 ( Murex HIV Ag/Ab Combination )
- Giang mai Âm tính pp Syphilis TP
Cho e hỏi phương pháp Xn giang mai là Syphilis TP vậy có bảo đảm chính xác chưa,e vẫn phải xn giang mai chốt lại tuần 12 chứ (hiện giờ e đc 6 tuần 4 ngày) ?
Bạn đang lo lắng về HIV cần tư vấn bạn ĐT hoặc thời gian phơi nhiễm HIV sắp hết 72 giờ. Bạn ĐT hoàn toàn miễn phí cho:Tuanmecsedec: 098.2727.393.
Tư Vấn Zalo : (0982727393) Tuanmecsedec
Giấy chứng nhận tham vấn số : 041/UB AIDS - TV do ủy ban phòng chống HIV/AIDS TPHCM cấp ngày 15/5/2009.
Có 1 người đang xem chủ đề. (0 thành viên và 1 khách)